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目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶mRNA在外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达与乙型肝炎的临床关系.方法 选择70例乙型肝炎患者(包括急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化)及10例HBsAg阴性的健康体检者.分别提取其PBMCs中的总RNA,经无RNA酶的DNA酶Ⅰ消化去除残存的基因组DNA后,逆转录合成cDNA.以HBV P基因区设计合成逆转录酶引物进行PCR扩增,检测HBV逆转录酶的表达情况.对1例阳性标本进行了克隆和测序,将所得序列与GenBank数据库中已知核苷酸序列进行同源性分析.结果 所得基因序列为379个核苷酸,与实验设计相符.与HBV adw2亚型标准一级结构比较,同源性为93.7%.对照组无1例HBV逆转录酶mRNA阳性表达;急性乙型肝炎组阳性表达率较低,为5.3%(1/15);慢性乙型肝炎组阳性表达率为33.3%(12/36),两组阳性率差异有显著统计学意义(P ＜ 0.05);肝硬化组阳性表达率为26.7%(4/15),与慢性乙型肝炎组比较,阳性率差异无统计学意义(P ＞ 0.05).PBMCs中HBV逆转录酶mRNA表达阳性组与阴性组肝功能比较,大部分指标差异有显著统计学意义(P ＜ 0.05).PBMCs中HBV逆转录酶表达阳性率与血清HBeAg、HBV DNA阳性率之间无相关性(r = 0.164、r = 0.07),其差异均无显著统计学意义(P ＞ 0.05 ).另外,乙型肝炎患者中,有家族史者的PBMCs逆转录酶mRNA阳性表达率占37.0%(10/27),而无家族史者的仅占16.3%(7/43),乙型肝炎患者的家族史与PBMCs HBV逆转录酶阳性表达有相关性(r = 0.229),差异有显著统计学意义(P＜ 0.05).结论 HBV逆转录酶在PBMCs中可独立复制,其表达与乙型肝炎的慢性化、重度化及家族聚集性有密切相关性,可为早期诊断指标之一.
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