【摘要】目的  建立基于重组酶介导等温扩增技术（RAA）-规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白（CRISPR-Cas13a）系统检测肺炎克雷伯菌（KP）的方法。方法 设计筛选检测KP特异的CRISPR RNA（crRNA）和RAA引物对，建立基于RAA-CRISPR-Cas13a技术快速准确检测KP的方法。RAA-CRISPR系统和荧光定量PCR（RT-qPCR）方法比较使用合成的KP质粒。从铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌和肺炎链球菌临床菌株中提取基因组DNA，进行RAA-CRISPR检测，评估该方法的特异性。收集2023年4月至2024年3月中国医学科学院北京协和医院50份临床样本（包含30份细菌培养KP阳性样本和20份KP阴性样本），分别使用RAA-CRISPR和RT-qPCR方法进行KP检测，比较两种方法的灵敏度、阳性符合率和阴性符合率。结果数据应用方差分析和配对t检验方法进行分析。结果 使用KP阳性质粒筛选出检测KP效果最佳的crRNA和RAA引物，建立了CRISPR-Cas13a检测KP的方法。RISPR-Cas13a检测KP质粒的灵敏度可达1拷贝/μl，高于RT-qPCR（10拷贝/μl）；特异性评价结果显示，未与非靶标菌株产生交叉反应，提示CRISPR-Cas13a系统特异性较好。样本检测以细菌培养为金标准，RAA-CRISPR和RT-qPCR两种方法的灵敏度分别为100%（30/30）和83.3%（25/30）；两种检测方法的阳性符合率分别为100%（30/30）和83.3%（25/30），阴性符合率均为100%。结论  本研究将RAA扩增技术与CRISPR-Cas13a技术相结合，建立了准确检测KP的方法，该方法可精准检测KP，有助于临床诊断KP感染以进行及时有效地治疗。