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评价全血DNA二代测序共有序列在人类免疫缺陷病毒优势准种研究中的准确性
作者:张媛媛   殷倩倩   杜鹏程   丁奕博   韩俊燕   林倩茹   马丽英 
单位:传染病预防控制国家重点实验室 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心病免室 
关键词:一代测序 二代测序 人类免疫缺陷病毒 共有序列 优势准种 
分类号:
出版年,卷(期):页码:2021,15(1):22-28
摘要:

    【摘要】目的 评价二代测序共有序列对人类免疫缺陷病毒(HIV)优势准种分析的代表性和准确性。方法 共收集29个HIV感染病例的32份全血样本,其中3个病例在随访期间发生耐药,分别采集治疗前和耐药后的两份样本。提取样本DNA,分别用二代测序和一代测序方法测定HIV pol区扩增产物序列。利用软件Sequencher(4.10.1)和Bowtie 2(v2.2.5)处理一代和二代测序数据,并利用自建分析脚本确定二代测序共有序列,利用Mega软件进行聚类分析,比较二代测序共有序列与一代测序序列的差异。结果 聚类分析结果表明,90.6%(29/32)来自于同一样本的序列被聚类在同一分支上,平均可信度为95.5%;与一代测序序列结果相比,二代测序平均每个碱基准确率为99.6%,完全不一致位点中碱基转换占81.6%(155/190),数量最多的为鸟嘌呤(G):腺嘌呤(A),共74个(占39.0%、74/190)。结论 二代测序共有序列与一代测序序列具有较高的一致性,二代测序共有序列可用于HIV优势准种分析,具有较好的代表性和准确性。

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