【摘要】目的 构建一种稳定的以病毒颗粒为基础的HIV核酸定量检测内标。方法 在实验室原有新型表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol的基础上，利用PCR扩增法在不改变p24保守区基础上突变核苷酸，经Gateway重组得到含突变碱基的pNL43-ΔENV-LUC-ATTR表达载体，该载体与水泡性口膜炎病毒（VSV）质粒共转染293细胞48 h后收集上清中HIV-1内标假病毒颗粒，检测p24抗原含量，定量假病毒滴度，以倍比稀释内标质粒、内标质粒与阳性标本混合品、内标假病毒颗粒与阳性标本混合品为模板进行实时定量PCR法，观察内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针的匹配情况，以及是否受样本探针引物的干扰。结果 定点突变表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol内的p24保守区片段；获得仅具有1次感染性的HIV-1假病毒颗粒（3.61 × 109 IU/ml）；p24抗原检测含量为283.2 pg/ml；实时定量PCR法确定内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针匹配良好，内标引物探针对阳性标本探针无干扰。结论 成功建立了一种以假病毒颗粒为基础的HIV-1核酸定量检测内标。