【摘要】 目的  克隆、表达结核分枝杆菌体内特异表达基因msh A（MSHA），并制备多克隆抗体进行免疫组织化学分析，研究MSHA的免疫原性、免疫反应性及体内表达情况。方法  采用高保真PCR法扩增结核分枝杆菌msh A基因，将基因克隆入表达载体pET30a（+），证实序列正确后转化入大肠埃希菌BL21（DE3），并采用IPTG诱导表达。将重组蛋白大量表达纯化后免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体并进行亲和纯化，用重组MSHA蛋白与其多克隆抗体进行Western blot鉴定。制备感染结核分枝杆菌的小鼠肺组织病理切片，尝试用免疫组织化学和抗酸染色法检测感染小鼠肺组织中结核分枝杆菌MSHA蛋白的表达。结果  成功扩增片段大小为1443 bp的msh A基因，构建了pET30a（+）：msh A重组表达载体，对57 kD大小的重组蛋白进行了大量表达及纯化，浓度为4 mg/ml。重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得了效价达25 600的多克隆抗体，纯化后的多克隆抗体浓度为5.58 mg/ml，效价仍达到25 600。免疫组织化学和进一步的抗酸染色显示，在小鼠肺组织切片中结核分枝杆菌分布处有深棕色MSHA免疫组织化学反应颗粒。结论 结核分枝杆菌MSHA蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，小鼠肺组织内的结核分枝杆菌中有该蛋白的表达。