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噬菌体展示技术在HBV前-S1蛋白反式激活基因1启动子DNA的结合蛋白筛选中的应用
作者:纪冬   成军   韩萍   邵清   陈国凤 
单位:解放军第302医院肝纤维化无创诊疗中心 
关键词:乙型肝炎病毒 乙型 前-S1蛋白 启动子转录启动子 DNA结合蛋白质类 
分类号:
出版年,卷(期):页码:2012,6(4):1-4
摘要:

    【摘要 目的  应用噬菌体展示技术筛选HBV前-S1蛋白反式激活基因1(PS1TP1)的启动子DNA结合蛋白,进一步阐述PS1TP1在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法  根据注册入GenBank的PS1TP1启动子DNA序列设计引物,运用PCR技术以人基因组DNA为模板,扩增得到获得PS1TP1启动子的DNA片段,并通过亚克隆方法建构建真核报告载体pCAT3-PS1TP1p,之后转染HepG2细胞系,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞中的氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测,以验证所得到获得的DNA片段具有启动子活性;将PS1TP1启动子DNA片段进行固相化,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,将所获得得到的噬斑裂解液进行PCR扩增,测序后进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索。结果  pCAT3-PS1TP1p瞬时转染的HepG2细胞的中CAT表达活性是对照组(pCAT3-Basic空载体)的32.9倍,是pCAT3-promoter的4.2倍,说明提示所得到获得的DNA片段具有启动子活性;经过四4轮筛选,共得到18个阳性克隆18个,经PCR扩增、测序,并经生物信息学分析后得了共筛选出PS1TP1启动子DNA结合蛋白编码基因共15个。结论  PCR扩增后所得到获得的PS1TP1启动子DNA片段具有顺式激活下游基因表达的作用,为研究PS1TP1启动子功能奠定了基础;噬菌体展示筛选结果提示PS1TP1可能参与了细胞周期调节、MAPK信号转导通路以及,并且有可能在辅助性T细胞亚群的发育和B细胞的分化过程中发挥作用淋巴细胞基因(过于笼统,请核实)表达的免疫调节过程。

基金项目:
国家自然科学基金(No. 30700713);北京自然科学基金(No. 7122177)
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