【摘要】目的 通过酵母双杂交方法筛选出肝细胞内乙型肝炎表面抗原大蛋白(LHBs)的结合蛋白,并验证LHBs与C53蛋白在肝细胞内的相互作用。方法 构建pGBKT7-LHBs做为诱饵质粒,从人肝脏cDNA文库筛选其相互作用蛋白的编码基因,发现其中包括C53基因。分别构建pCMV-5a-C53和pACT-C53质粒,采用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀的实验方法验证肝癌细胞系HepG2内这两种蛋白之间的相互作用。结果 成功人肝脏cDNA文库筛选出其C53蛋白;成功构建了pCMV-5a-C53和pACT-C53质粒,并通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀方法明确了LHBs及C53在肝细胞内的相互作用。结论 肝癌细胞系HepG2内LHBs及C53存在明确的相互作用,为进一步研究相互作用对相关生物学功能的影响奠定了前期基础。
|